自然流產(SA)小鼠模型

Mouse Model for Spontaneous Abortion (SA)

RSA;Miscarriage; Pregnancy loss;Recurren Spontaneous Abortion

  • 編號DSI638Mu01
  • 物種Mus musculus (Mouse,小鼠) 相同的名稱,不同的物種。
  • 原型物種
  • 來源Clark經典反復流產小鼠模型(CBA/J與DBA/2)
  • 模式動物品系雌性CBA/J,雄性DBA/2,雄性BALB/c小鼠
  • 實驗分組正常妊娠對照組,健康未妊娠對照組,RSA模型組,RSA治療組
  • 實驗周期6~8 weeks
  • 建模方法RSA小鼠模型建立
    將雌性CBA/J與雄性BALB/c小鼠按2:1比例合籠交配建立正常妊娠小鼠模型,雌性CBA/J小鼠與雄性DBA/2小鼠按2:1比例合籠交配建立(復發性流產)RSA小鼠模型,檢出陰栓者計為妊娠第0天。
    實驗共分4組:
    治療組(雌性CBA/J 10只、雄性DBA/25只)
    RSA模型組(雌性CBA/J 10只、雄性DBA/25只)
    正常妊娠對照組 (雌性CBA/J 10只、雄性BALB/c 5只)
    健康未妊娠對照組(雌性CBA/J 10只)
    各組從妊娠第0日開始灌胃給藥,每組10只雌鼠。
    劑量根據成人70kg臨床用藥劑量按動物體表面積換算,灌胃容積均為0.4mL/20g。正常妊娠組和RSA模型對照組給予相同體積蒸餾水,連續灌胃給藥14d,末次給藥1h后處死小鼠,取其外周血和蛻膜組織。
  • 應用可用于研究預防和治療RSA的藥物
  • 下載 英文說明書   中文說明書
  • 規格 每例
  • 價格 ¥ 720
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  • 自然流產(SA)小鼠模型 產品包裝(模擬)
  • 自然流產(SA)小鼠模型 產品包裝(模擬)
  • 自然流產(SA)小鼠模型 Fig. DBA-2 mouse,male
  • 自然流產(SA)小鼠模型 Fig. CBA-J mouse,female
  • Certificate 通過ISO 9001、ISO 13485質量體系認證

模型評價

黑龙江36选7 www.bqukf.com 流式細胞數檢測PBMCs中Th17/Treg細胞比例:
分離小鼠PBMCs后,按工作濃度加入佛波酯,Ionomycin,Monensin,37°C孵育4~6h,設同型對照管和檢測管。Fc受體阻斷劑封閉后,分別加入CD4表面抗體染色,混勻,室溫避光孵育15min后每管按操作要求先后加入固定液和破膜/溶血液,洗滌后實驗管分別加入2種配色抗體,對照管加入同型對照抗體。避光孵育后,加入洗滌劑離心棄上清,重懸細胞,24h內上機檢測。以CD4直方圖射門,以散點圖染色陽性表示Th17細胞和Treg細胞,用Cellsquest軟件獲取并分析數據。(一個樣本分為兩種染色方案,Th17:CD4-FITC、IL-17-PE;Treg:CD4-FITC、CD25-APC、Foxp3-PE)

RT-PCR檢測PBMCs中FOXP3、RORrt、STAT3、STAT5的表達:
分別提取各組PBMCs總RNA,并進行RNA純度和完整性鑒定;設計引物,逆轉錄成cDNA,以β-actin為內參,然后進行實時熒光定量RT-PCR;采用相對定量法利用Ct計算FOXP3、RORrt、STAT3、STAT5 mRNA的相對量。

組織病理學

1.HE染色觀察局部組織細胞病理結構改變:
取各組小鼠蛻膜組織,包埋石蠟切片,HE染色。
2.電鏡觀察局部組織細胞凋亡和病理結構改變:
無菌取各組小鼠蛻膜組織,加入2.5%戊二醛進行預固定,1%鋨酸進行后固定,再逐級用乙醇和丙酮進行脫水,樹脂包埋,制備成超薄切片,醋酸雙氧鈾-硝酸鉛溶液進行雙重染色,置投射電鏡下進行觀察。
3.免疫組化分析局部組織細胞因子STAT3、STAT5表達:
4.RT-PCR檢測蛻膜組織中的FOXP3、RORrt、STAT3、STAT5 mRNA表達。
5.Western blot檢測蛻膜組織中的STAT3、STAT5蛋白表達

標志因子水平

6.1ELISA檢測脫膜組織勻漿中的IL-2、IL-6。
收集各組蛻膜組織,組織勻漿后取上清進行ELISA檢測。

6.2ELISA檢測細胞因子IL-2、IL-6和TGF-β1表達:
取各小鼠血清,使用IL-2、IL-6和TGF-β1 ELISA kit,按照試劑盒說明書進行操作,在酶標儀上設定標準曲線,每個標本和標準品均設3個復孔。用酶標儀讀取血清樣本的吸光度值(A),通過標準曲線計算樣本濃度值。

統計學分析

應用SPSS軟件進行統計分析,計量資料以均數±標準差(x ±s)表示,采用t檢驗,組間比較采用單因素方差分析,P<0.05表示有顯

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